离子交换层析是蛋白质、核酸及多肽纯化的关键技术，离子交换层析柱在使用中常因操作不当或维护缺失出现柱压异常、峰形畸变、回收率下降等问题。若不及时处理，不仅影响分离效果，还可能造成昂贵填料的损伤。掌握
离子交换层析柱典型故障的快速诊断与应对策略，是保障实验效率与数据可靠性的关键。
问题一：柱压显著升高
原因：样品未过滤导致颗粒堵塞筛板；缓冲液析出结晶；微生物滋生形成生物膜。
对策：
立即停止运行，反向低流速（如30%正常流速）冲洗；
拆下入口筛板，用超声清洗或更换；
若为盐结晶，先用去离子水冲洗，再逐步过渡至保存液；
日后务必确保样品经0.22μm滤膜过滤，缓冲液现配现用。
问题二：目标蛋白回收率骤降
原因：填料结合位点被杂质占据；pH或离子强度设置偏离条件；填料老化失活。
对策：
执行完整再生程序：1MNaCl洗脱强结合杂质→0.5–1.0MNaOH清洗（确认填料耐受）→平衡缓冲液重新平衡；
验证上样缓冲液pH是否在目标分子pI±1范围内；
若多次再生无效，测试标准蛋白结合能力，判断是否需更换填料。
问题三：色谱峰拖尾或分叉
原因：柱床塌陷或产生沟流；进样体积过大；非特异性吸附。
对策：
检查柱床是否平整，轻敲柱体观察液面是否波动；自制柱可重新匀浆装填；
减少上样体积（通常≤柱体积的1–2%）；
在缓冲液中添加0.01–0.1%Tween-20减少疏水吸附，或提高起始洗脱盐浓度。
问题四：保留时间漂移
原因：柱未充分平衡；温度波动；流速不稳定。
对策：
延长平衡时间（至少5–10CV），直至电导与pH稳定；
将层析系统置于恒温环境，避免空调直吹；
校准泵流速，检查是否有气泡进入流路。
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